Нам удалось найти новую супрамолекулярную структуру в межклеточном пространстве тканей позвоночных, состав которой оказался исключительно консервативен: она состояла из известных в науке белков и их фрагментов – пептидов. Но этим данная структура отличалась от ВКМ (внеклеточный матрикс) и адгезивных сайтов – ассоциатов белков, обусловливающих взаимодействие клеток.
Найденные нами в межклеточных пространствах животных тканей белково-пептидные комплексы проявляли исключительно выраженную тенденцию к образованию между собой ассоциатов — достаточно крупных наноразмерных частиц. В образовании таких комплексов участвовали ионы кальция. Биологической активностью обладали пептиды, представляющие собой фрагменты известных адгезивных белков или мембранных ферментов. Связанные с ними белки оказались тремя изоформами сывороточного альбумина. Именно эти изоформы, отличающиеся друг от друга аминокислотами в нескольких положениях, влияли на активность пептидов, причем по-разному, в некоторых случаях их взаимодействие с пептидами приводило к полной утрате биологической активности, в других случаях, наоборот, образование пептидно-белкового комплекса делало его исключительно активным.
Следует отметить, что биологическое действие пептидно-белковых комплексов, составляющих основу биорегуляторов малого матрикса, характеризовалась наличием тканевой, но отсутствием видовой специфичности. То есть биорегулятор, выделенный из органа, например, печени быка, оказывал влияние на клетки печени любого позвоночного животного.
Одними из первых объектов исследования были ткани печени и легкого крыс, поскольку всегда исследования стараются проводить на экспериментальных животных. Итак, мы искали адгезивные белки в этих тканях. Для чего необходим был метод биотестирования, т.е. метод, с помощью которого можно было определять наличие адгезивного белка в исследуемой фракции, получаемой в процессе, например, очистки экстракта. Такой метод удалось разработать. Фактически, этим методом мы измеряем изменение вязко-упругих свойств плазматической мембраны клеток печени в условиях стандартной сдвиговой деформации (при дезинтеграции тканевого фрагмента изменяется соотношение количества целых клеток к количеству выделившихся клеточных ядер).
Оказалось, что после получения экстрактов ткани и воздействия сернокислым амммонием (высаливание белков) происходит осаждение белков, а в надосадочной жидкости остаются белково-пептидные комплексы, которые и способны влиять на вязко-упругие свойства мембран клеток, а также и на межклеточные взаимодействия в ткани. Так был разработан первый этап очистки биорегуляторов малого матрикса. Затем стали исследовать другие ткани млекопитающих: ткани желез – поджелудочной, щитовидной, молочной, предстательной, мозг –головной и костный, сыворотку крови, секреты желез – молоко, желчь и др. Особое внимание было уделено тканям глаза, которые можно достаточно легко получить в изолированном виде и изучать отдельно друг от друга.
Нас интересовал вопрос влияния биорегуляторов малого матрикса на дифференцировку клеток и, конечно же, — вопрос тканевой специфичности, который удобно было изучать именно на этом объекте. Биорегуляторы малого матрикса были выделены практически из всех тканевых структур глаза быка. Так были получены © Виофтаны: из роговицы склеры, хрусталика, стекловидного тела, нейральной сетчатки, пигментного эпителия, глазного нерва. Они были так же устроены, как и © Виоргоны, – представляли собой «белково-пептидные комплексы», содержащие ионы Са, причем их биологическая активность характеризовалась проявлением тканевой, но не видовой специфичности.
